1. Цикл общей денатурации в течение 2 минут при температуре 94˚С;
2. Этап амплификации с флюоресцентной детекцией. Он включал в себя денатурацию в течение 10 секунд при температуре 94˚С и отжиг, при температуре, специфичной для каждой исследуемой мутации (61-67˚С), в течение 15 секунд.
Регистрацию сигнала ПЦР в реальном времени проводили по каналам, соответствующим флуорофорам FAM и RОХ, детектирующим продукт амплификации нормального и мутантного аллеля (соответственно).
Гетероплазмию мт мутаций определяли по ∆Ct линейной фазы логарифмической кривой, с применением формулы G%=100/(1+2^∆Ct), где G% - процент гетероплазмии.